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RNA的提取中为什么要先加异丙醇再加乙醇? 第1页

  

user avatar   fung-steel 网友的相关建议: 
      

抽RNA如果希望得率高,可以先加入NaCl或醋酸铵,再加异丙醇,-20度醇沉过夜。第二天离心去上清,用乙醇洗两遍。

下面说原理:

1. 把溶液调成高盐:

盐离子和RNA抢水,破坏RNA的水化层,导致RNA和水的亲和力降低,方便醇沉。

如果你的RNA少,醇沉不出来,推荐加盐。

有次体外转录RNA,手边RNase free的高盐溶液用完了,省了这步,就没醇沉出RNA。第二天重做,加了盐,RNA就出来了。

2. 先用异丙醇醇沉:

异丙醇和RNA抢水,破坏RNA的水化层,导致RNA析出沉降。

异丙醇羟基多,抢水能力大于乙醇,醇沉效果更好。

但是,异丙醇挥发性远远低于乙醇,很难晾干。

3.后用乙醇洗两遍:

乙醇可以带走高盐留下来的盐离子,带走挥发不干净的异丙醇,带走醇沉时同样析出的蛋白质和脂类。

乙醇挥发快,很快就能干,是异丙醇比不了的优点。

具体步骤,可参考NEB E2050说明书的RNA纯化。

评论区有人说搜不到,可以百度NEB,进入NEB主页,搜索E2050,进入产品页,下载PDF。

具体步骤和原理,也可参考分子克隆指南。尽管这书特别有用,不过我猜很多人都没兴趣翻这本大部头。




  

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