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做染色质免疫共沉淀ChIP一定要用ChIP级别的抗体嘛? 第1页

  

user avatar   fung-steel 网友的相关建议: 
      

不要相信抗体公司说明书的内容。

公司标注抗体可以做ChIP,这只说明公司用来测试时那支抗体可以做ChIP。

你买的抗体,批号和公司测试的抗体不同,就可能什么都不能做。

举个例子,抗体公司里最靠谱的是CST。

我买过8个抗体用来做Western Blot,测试下来,4个条带大小正确,且杂带很少。正确率50%。

有家武汉的国内公司,有次来推销抗体,买了7个做WB,全错,一生黑。

为什么抗体不稳定。

对于多抗而言,抗体同一货号,指它们的抗原完全相同。同一个抗原,免疫了多个兔子(批号),每个兔子的免疫反应不同,不同兔子(批号)产生的抗体也千差万别。

所以,抗体同一货号没用,相同批号的抗体才可能完全相同。

我一般有单抗买单抗,但有些单抗批次不同效果也不同,只能猜是公司抗体纯化做得渣,抗体不稳定。

所以,ChIP抗体,别管公司介绍说什么,也别管文献里说这个公司这个货号好不好用,先买回来。

回来做个WB,确定抗体条带正确,且不能有杂带。

再做个IP,看这个抗体能不能拉蛋白,拉蛋白的效率如何。如果能做IP,基本能做ChIP。

有些抗体即使说明书没标注可以做ChIP,拿回来会发现可以做ChIP,只能靠多试。




  

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