怎么判断最佳测定波长？ 第1页

最佳测定波长如何选择？总结下来三句话——“干扰最小，吸收最大，导数为零”。

吸收最大很好理解，就是待测物在该波长的吸光度尽量大——因为此时的灵敏度最高。

干扰最小什么意思呢，就是在所选的测定波长，其他杂质应该基本没有吸收，所以不会影响测定——这也是为什么在你的问题中槲皮素不能选择在204 nm测定。绝大多数的溶剂，都在204 nm左右会有吸收，比如说水和乙醇都有极大的吸收——这些吸收会干扰槲皮素的测定。从下面两张图中你可以看到，水、乙醇等溶剂在300 nm波长以下有极大的吸收^[1][2]，这也是为什么大多数的UV-Vis都不会选择300 nm以下的波长。

下面我再来讲讲导数为零是什么意思。由于测定光不一定是严格的单色光，所以也会引入一些误差。为了使得这部分的误差足够小，我们可以选择吸收系数对波长的导数为零的位置进行测量——比如说波峰或者波谷。下面我自己造了一组数据来演示一下：

在我的这组数据中，待测物在250和550 nm有吸收峰，而干扰物在230 nm有吸收峰。因此，根据“干扰最小”原则，我们不能选择250 nm。这时候，你会发现，在326 nm时干扰物已经基本没有吸收了，而且此时待测物的吸收系数还比在550 nm时的强。但是，根据“导数为零”原则，选择550 nm比326 nm是要更好的，因为非单色光带来的误差会小得多。

参考

1. ^Ultraviolet (250–550  nm) absorption spectrum of pure water https://www.osapublishing.org/ao/abstract.cfm?uri=ao-55-25-7163
2. ^ https://www.sciencedirect.com/topics/chemistry/uv-absorption