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如果真核细胞的基因导入原核细胞内需切除内含子,内含子如何切除? 第1页

  

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在原核生物中表达真核基因,只表达外显子,不会转化入包括内含子的真核基因全长。

具体来讲,在原核生物中表达真核生物基因,一般通过质粒直接表达真核基因的编码区序列(CDS,也就是翻译出蛋白的序列/外显子区),不涉及内含子剪接问题。通常步骤为:

1. 在NCBI上通过gene选项搜索目标基因的CDS区,目标基因如果有多个CDS(可变剪接下,一个mRNA产生多个编码区,编码多个蛋白),选择自己想要的CDS,下载对应的genbank文件,序列就拿到手了。CDS序列中不含内含子,不涉及内含子剪接问题。

2. 选择想要的原核表达载体,在原核启动子后面插入目标CDS序列,构建载体(由于真核基因在原核生物表达,不同物种密码子偏好不同,有时为了提高蛋白表达效率,也可找公司合成密码子优化版本的CDS)。

3. 质粒转化入原核生物,在原核生物中表达蛋白。




  

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