基因敲除的常用通路不是同源重组,而是不利用同源模板的末端连接(NHEJ)。所以在细胞周期任何时候都可以发生基因敲除。
具体来说,非同源末端连接(Non-homologous End Joining,NHEJ)是细胞产生 DNA 双链断裂后,在不依赖 DNA同源性的情况下,将两个 DNA 断端连接在一起的 DNA 修复机制。DNA断了,末端直接拼起来,细胞里90%的DNA双链断裂都是靠NHEJ修复的。
NHEJ有什么特点呢?拼的时候不可控,可能发生几个碱基插入或是缺失,造成移码,蛋白序列全乱,就把基因敲掉了。
大多数基因敲除还是利用NHEJ的原理,而不是同源重组。